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Cellutron 說明書
產品時間：2022-08-29
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穩定的細胞系開發
Cellutron 提供定制的高質量穩定細胞系服務，以優化生產您感興趣的蛋白質?；虻郊毎瞻ɑ蚝铣?、靶向載體構建、細胞培養、轉染、穩定細胞系的藥物選擇和轉基因表達的確認。憑借*的載體技術，Cellutron 能夠在多種細胞類型中產生穩定的細胞系，包括小鼠和人類干細胞以及 iPS 細胞。
穩定細胞系-G 穩定細胞系-R
在熒光報告基因的初始轉導兩個月后，穩定轉染的小鼠胚胎干細胞表達 GFP 或 RFP。
親代細胞系：人和小鼠胚胎干細胞和 iPS、HEK293、CHO、BHK、NS0 細胞、H9C2 或細胞系。
穩定細胞系產生的過程和時間線：
1. 哺乳動物細胞表達載體的基因合成與構建
進行優化的基因合成并將基因克隆到哺乳動物細胞表達載體中（1 周）
2. 轉基因表達分析
用表達載體轉染親本細胞系并通過 RT-PCR/Western blot/ELISA 評估轉基因的表達（1 周）
3. 篩選穩定轉染子
對*克隆進行穩定性篩選并評估最終細胞系的 10 次傳代。（約 4 周）
向客戶提供 2 瓶*穩定克隆
請聯系客服索取申請表。
肌節 α 肌動蛋白的免疫細胞化學染色
心肌細胞在 60 mm 板中培養
用 1X PBS 沖洗細胞，在室溫下用 PBS 中的 3.7% 甲醛固定細胞 10 分鐘，然后在 70% ETOH 中 5 分鐘，用 PBS 中的 0.2% Triton-X 100 孵育 5 分鐘，然后用 1X PBS 洗滌細胞兩次5分鐘。
用 1ml 2% BSA 的 PBS 孵育細胞 30 分鐘。在板中加入針對肌節 α 肌動蛋白 (Sigma, Cat#: A2172) 的原代小鼠抗體 1 小時，室溫，O/N，4°C。
用 1X PBS 清洗細胞 3 次，每次 10 分鐘。
與 HRP 偶聯的二抗在室溫下針對小鼠孵育 1 小時
用 1X PBS 清洗細胞 3 次，每次 10 分鐘。
用 1 ml DAB 溶液孵育 10 分鐘。用 1X PBS 清洗。
*在您需要之前準備新鮮的 DAB（Sigma，Cat#：D8001）溶液：
* 在 37 C 下解凍 DAB 原液，直到不再渾濁。將 5ul 的 DAB 原液添加到 1ml 的 1X PBS 中。加入 1ul 的 30% H2O2 并充分混合。
在顯微鏡下檢查染色的細胞。
成人心肌細胞分離
成年大鼠/鼠
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